Análisis del artículo
Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.
Objetivos: Desarrollar un método
sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de
pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)
utilizando cebadores específicos y tecnología de sonda fluorescente de
unión de surcos TaqMan menor.
Muestra biológica: Suero.
Tipo de ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.
Gen a amplificar: Para el VHB se uso el gen S, con un tamaño de 116 bp.
Para el VHC se se amplifico la región no codificante, con un tamaño de 238 bp.
Tipo de PCR: rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
Extención: 72 ºC por 2 minutos.
qPCR: 45 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
Extención: 72 ºC por 2 minutos.
V: Todos los
productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de
poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.
Especificidad analitica:
La especificidad analítica de los marcadores serológicos producidos por el virus de la hepatitis B y C se evaluaron en una amplia gama de muestras (suero) tomadas de los pacientes. Se encontró que las pruebas tipo ELISA no tienen una especificidad insuficiente para detectar virus de la Hepatitis B o C, encontrandoce una especificidad mucho más alta mediante la realización de la rt-PCR y la qPCR.
Sensibilidad analítica:
En este estudio,
el ensayo qPCR detectó cargas de ADN del VHB que oscilaban entre 5,1 ×
109 y 5,1 × 102 UI / ml y ARN del VHC que oscilaban entre 4,9 × 109 y
4,9 × 102 UI / ml en suero. Además, el ensayo
cuantificó de manera eficiente ambos virus (r2 = 0,99), con un LOD
adecuado (1,9 × 102 UI / ml) para una qPCR interna. Para
demostrar la efectividad del ensayo de qPCR propuesto en este estudio,
se analizaron muestras clínicas de pacientes infectados con VHB o VHC. Los
resultados sugieren que el ensayo puede usarse para cuantificar cargas
virales bajas y altas y que su eficacia de amplificación es estable.
Video: Proceso para realiar una rt-PCR y qPCR
Bibliografía
Gomes D, Menezes C, Oliveira C. In.house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections. Brazil Journal Microbiology. Pubmed (Interned). Publicado octubre 2016. Consultado junio 2018. Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/
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