domingo, 3 de junio de 2018

PRUEBA DE PCR EN HEPATITIS VIRAL


Análisis del artículo

Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.
Objetivos: Desarrollar un método sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores específicos y tecnología de sonda fluorescente de unión de surcos TaqMan menor.
Muestra biológica: Suero.
Tipo de ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.
Gen a amplificar: Para el VHB se uso el gen S, con un tamaño de 116 bp. 
                               Para el VHC se se amplifico la región no codificante, con un tamaño de 238 bp.
Tipo de PCR: rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
                                                       Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                       Extención: 72 ºC por 2 minutos.
                         qPCR: 45 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
                                                      Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
                                                      Extención: 72 ºC por 2 minutos.
V: Todos los productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.
Especificidad analitica:
La especificidad analítica de los marcadores serológicos producidos por el virus de la hepatitis B y C se evaluaron en una amplia gama de muestras (suero) tomadas de los pacientes. Se encontró que las pruebas tipo ELISA no tienen una especificidad insuficiente para detectar virus de la Hepatitis B o C, encontrandoce una especificidad mucho más alta mediante la realización de la rt-PCR y la qPCR.
Sensibilidad analítica:
En este estudio, el ensayo qPCR detectó cargas de ADN del VHB que oscilaban entre 5,1 × 109 y 5,1 × 102 UI / ml y ARN del VHC que oscilaban entre 4,9 × 109 y 4,9 × 102 UI / ml en suero. Además, el ensayo cuantificó de manera eficiente ambos virus (r2 = 0,99), con un LOD adecuado (1,9 × 102 UI / ml) para una qPCR interna. Para demostrar la efectividad del ensayo de qPCR propuesto en este estudio, se analizaron muestras clínicas de pacientes infectados con VHB o VHC. Los resultados sugieren que el ensayo puede usarse para cuantificar cargas virales bajas y altas y que su eficacia de amplificación es estable.

Video: Proceso para realiar una rt-PCR y qPCR

Bibliografía
Gomes D, Menezes C, Oliveira C. In.house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections. Brazil Journal Microbiology. Pubmed (Interned). Publicado octubre 2016. Consultado junio 2018. Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/  

2 comentarios:

  1. Me diagnosticaron portador de HEPATITIS B en 2013 con fibrosis del
    hígado ya presente. Empecé con medicamentos antivirales que
    inicialmente redujo la carga viral. Después de un par de años, el virus
    se volvió resistente. Comencé a investigar para una posible cura y finalmente conocí muchos Testimonios de personas que se curaron con medicinas a base de hierbas que obtuvieron de este herbolario llamado Dr. OSE .. Decidí contactarlo por correo electrónico: droseherbalhome@gmail.com, 3 días después de que me comuniqué con él sobre el tratamiento a base de hierbas para la HEPATITIS B, me envió el medicamento a través de DHL a mí en marzo de 2020.
    El tratamiento revirtió totalmente el virus. Hice otro análisis de sangre después
    el tratamiento de 3 meses y dio negativo al virus. Increíble
    ¡tratamiento! Este tratamiento es un gran avance para todos los portadores del VHB.

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