En el artículo que se presenta a continuación (Targeting Hepatitis B Virus With CRISPR/Cas9) se desarrollo una plataforma CRISPR/Cas9 mediante la cual se ha logrado la inactivación eficiente de genes virales NTCP, que expresan células HepG2, las mismas que son responsables de permitir la infección por VHB. Otro punto importante es la demostración de que cccDNA puede ser inactivado mediante las roturas de ADN de doble cadena inducidas por Cas9.
Esta investigación es muy prometedora ya que va en buen camino hacia la inactivación de genes que participan en la hepatitis B. Si deseas saber más dirígete al enlace de la bibliografía.
En los últimos años las investigaciones en torno a los posibles tratamientos basados en células madre están teniendo una gran relevancia, ya que a partir de la las CM se podría desde curar una enfermedad hasta regenerar un órgano por completo.
En el siguiente artículo se muestra como mediante el uso de células madre mesenquimales se logró reducir la tasa de mortalidad en pacientes que desarrollaron insuficiencia hepática crónica debido a la presencia de hepatitis B, además los pacientes mostraron un bajo desarrollo de complicaciones al tratamiento, cosa que no ocurrió con el grupo de control que recibía un tratamiento standar.
Siquieres saber más accede al link de la bibliografía.
Bibliografía
Chen B, Wang YH, Qian JQ, Wu DB, Chen EQ, Tang H. Human mesenchymal stem cells for hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure: a systematic review with meta-analysis. Pubmed (Internet). Publicado mayo 2018. Citado junio 2018. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29727380
Un ejemplo de ADN recombinante en la naturaleza es la Recombinación genética. La recombinación genética es un proceso mediante el cual se obtiene un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA, los cuales tienen orígenes diferentes.
Mediante la recombinación genética la información genética de dos genotipos puede ser agrupada en un nuevo genotipo. Es así que la recombinación genética es una forma efectiva a través de la cual se mantiene e incluso aumenta la variabilidad genética de una población.
Ejemplos de recombinación genética:
- Recombinación homóloga
- Recombinación no homóloga
- Entrecruzamiento cromosómico
- Recombinación específica de sitio
De los ejemplos mencionados, el entrecruzamiento cromosómico es uno de los más comunes, ya que se produce cada vez que se va a desarrollar un nuevo ser. En el entrecruzamiento cromosómico los
cromosomas emparejados de cada progenitor se alinean de manera que las
secuencias similares de ADN de cada par de cromosomas se puedan cruzar
entre sí. El entrecruzamiento cromosómico genera una mezcla del material
genético y es una causa importante de la variación genética observada
en la descendencia.
ADN recombinante artificial en la hepatitis
Artículo: Cloning and high-level expression of Thermus thermophilus RecA in E. coli: purification and novel use in HBV diagnostics.
El gen sintético de thermophilus RecA se clonó en el vector pUC57. Este gen(RecA gen) se escindió del pUC57- RecA plásmido como un fragmento NdeI / HindIII y se clonó en el vector pET26b. El ADN plasmídico que se obtuvo de pET26b se introdujo en células competentes ER2566 para la expresión de RecA recombinante.
La expresión de esta proteína puede mejorar las técnicas de diagnóstico, ya que mejora la sensibilidad a virus de ADN como es el caso de la hepatitis B.
2. Sundarrajan S, Rao S, Padmanabhan S. Cloning and high-level expression of Thermus thermophilus RecA in E. coli: purification and novel use in HBV diagnostics. Pubmed (internet). Publicado abril 2018. Citado junio 2018. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1517838217309656?via%3Dihub
En el siguiente artículo (Expression Profiling of Cellular MicroRNA in Asymptomatic HBsAg Carriers and Chronic Hepatitis B Patients) podremos leer como se usó la técnica MICROARRAY para determinar la presencia de ciertos microRNA (miRNA). Estos miRNA pueden servir como marcadores potenciales para predecir la lesión hepática resultante de la hepatitis B crónica (CHB). Se identificó 203 miRNA expresados en pacientes con hepatitis B crónica. Este resultado, en un futuro, puede servir para realizar un diagnóstico precoz de lesión hepática y prevenir su avance hacia otros estados más graves.
Si deseas saber más dirígete al link de la bibliografía.
Bibliografía:
Xianliang Hou, Yan Liang, Jianing Chen. Expression Profiling of Cellular MicroRNA in Asymptomatic HBsAg Carriers and Chronic Hepatitis B Patients. Pubmed (Internet). Publicado agosto 2017. Consultado junio 2018. Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5587942/
Tema: PCR cuantitativa en tiempo real para el diagnóstico del virus de la hepatitis B y el virus de la hepatitis C.
Objetivos: Desarrollar un método
sensible para cuantificar ADN de VHB y ARN de VHC en sueros de
pacientes infectados mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)
utilizando cebadores específicos y tecnología de sonda fluorescente de
unión de surcos TaqMan menor.
Muestra biológica: Suero.
Tipo de ácido nucleico: ADN de VHB y ARN de VHC.
Gen a amplificar: Para el VHB se uso el gen S, con un tamaño de 116 bp.
Para el VHC se se amplifico la región no codificante, con un tamaño de 238 bp.
Tipo de PCR: rt-PCR: 35 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 1minuto.
Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
Extención: 72 ºC por 2 minutos.
qPCR: 45 ciclos: Desnaturalización: 95ºC por 15 segundos.
Anillamiento: 60ºC por 1 minuto.
Extención: 72 ºC por 2 minutos.
V: Todos los
productos de PCR se visualizaron mediante electroforesis en gel de
poliacrilamida al 6% y tinción de geles con nitrato de plata.
Especificidad analitica:
La especificidad analítica de los marcadores serológicos producidos por el virus de la hepatitis B y C se evaluaron en una amplia gama de muestras (suero) tomadas de los pacientes. Se encontró que las pruebas tipo ELISA no tienen una especificidad insuficiente para detectar virus de la Hepatitis B o C, encontrandoce una especificidad mucho más alta mediante la realización de la rt-PCR y la qPCR.
Sensibilidad analítica:
En este estudio,
el ensayo qPCR detectó cargas de ADN del VHB que oscilaban entre 5,1 ×
109 y 5,1 × 102 UI / ml y ARN del VHC que oscilaban entre 4,9 × 109 y
4,9 × 102 UI / ml en suero.Además, el ensayo
cuantificó de manera eficiente ambos virus (r2 = 0,99), con un LOD
adecuado (1,9 × 102 UI / ml) para una qPCR interna.Para
demostrar la efectividad del ensayo de qPCR propuesto en este estudio,
se analizaron muestras clínicas de pacientes infectados con VHB o VHC.Los
resultados sugieren que el ensayo puede usarse para cuantificar cargas
virales bajas y altas y que su eficacia de amplificación es estable.
Video: Proceso para realiar una rt-PCR y qPCR
Bibliografía
Gomes D, Menezes C, Oliveira C. In.house quantitative real-time PCR for the diagnosis of hepatitis B virus and hepatitis C virus infections. Brazil Journal Microbiology. Pubmed (Interned). Publicado octubre 2016. Consultado junio 2018. Disponible en https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5052370/
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